🧬 · 全血总RNA提取Protocol

Posted on 2025/1/16

参考文献: 姚媛，陈悟，陈曦，等．2019．环境流行病学研究中全血长期保存与RNA提取方法［J］．环境科学学报, 39(12):4301-4308
DOI： 10.13671/j.hjkxxb.2019.0234

1. 样本采集

将5mL TRIzol 试剂加入RNase-free 15mL离心管中。采得血样后立即将0.5mL全血转移至离心管中，吹吸混匀，得到5.5mL的全血-TRIzol混合体系。混合体系分装至RNase-free 1.5mL EP管中，置于-80℃冰箱，可长期保存待后续提取全血RNA。

2. 样本解冻

将样品从-80℃取出后至于室温铝块上快速解冻，完全融化后转移至新的RNase-free EP管中。

3. 相分离

加入200μL氯仿，剧烈振荡至充分混合，室温孵育3min，然后4℃ 12000g离心20min。
离心后样品分层，小心吸取上层水相，转移至新管。

4. 沉淀

向水相中加入800μL异丙醇, 15μL醋酸钠溶液，颠倒混匀。
将混合体系置于-20℃沉淀6-8小时。
4℃ 12000g离心20min，得到总RNA沉淀。

5. 洗涤、溶解

分别使用75%和100%乙醇洗涤沉淀，晾干
加入20uL RNase-free水溶解